方法名称：胞磷胆碱钠的测定——液相色谱法

　　应用范围：本方法采用液相色谱法测定胞磷胆碱钠(C14H25N4NaO11P2·H2O)的含量。

　　该方法适用于胞磷胆碱钠。

　　方法原理：将供试品制成水溶液，进入液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器在276nm波长处检测胞磷胆碱钠吸收值，计算其含量。

　　试剂：1.甲醇

　　2. 磷酸盐缓冲液

　　3. 四丁基磷酸铵溶液

　　仪器：1.仪器

　　1.1 液相色谱仪

　　1.2 色谱柱

　　十八烷基硅烷键合硅胶 凝胶作为填充

　　1.3 紫外吸收检测器

　　2.色谱条件

　　2.1 流动相：磷酸盐缓冲液甲醇 = 95 5.

　　2.2 检测波长：276nm

　　2.3 柱温：室温

　　样品制备：1.磷酸盐缓冲液

　　0.1mol/L磷酸二氢钾溶液和磷酸四丁铵溶液等量混合。

　　2.磷酸四丁铵溶液

　　取0.01mol/L氢氧化四丁铵溶液，用磷酸调pH至4.5.

　　3.称取供试品

　　精确称取适量本品。

　　4.对照品溶液的制备

　　准确称取适量的5'-胞苷酸，加水配成每1mL含0.25mg的溶液，取上述溶液适量，混匀与胞磷胆碱钠参比物质相同的量。 摇匀即可。

　　5. 供试品溶液的制备

　　将供试品溶于水后，配成每1mL含0.25mg的溶液，摇匀，即得。

　　注：“精密称量”是指称量应精确到所取重量的千分之一。“精密测量”是指测量体积的准确度应满足国家标准中体积移液器的准确度要求。

　　操作步骤：分别精确吸取上述对照品溶液和供试品溶液各10μL到液相色谱仪中，用紫外吸收检测器在276nm波长处测定胞磷胆碱钠的吸收值，计算其含量。