谷胱甘肽含量测定的常见原理

2021-01-13

  谷胱甘肽含量测定的常见原理

  GSH是细胞内最主要的抗氧化巯基物质,在抗氧化、蛋白质巯基保护和氨基酸跨膜运输等中具有重要作用,还原型与氧化型比值(GSH/GSSG)是细胞氧化还原状态的主要动态指标。因此,测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值,能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态,也是谷胱甘肽氧化还原循环的主要指标之一。

  1、谷胱甘肽还原型测定原理:

  谷胱甘肽能和 5.5’二 硫代-双-(2-密斑油甲酸)反应产生 2-硝基-5-苯硫醇甲酸和谷胱甘肽二 硫化物(GSSG),2-硝基-5-苯硫醇甲酸为黄色产物,在波长412nm处具有最大光吸收,其吸光度与GSH含量成正比。

  2、氧化型谷胱甘肽测定原理:

  氧化型谷胱甘肽(GSSG)是谷胱甘肽(GSH)的氧化形式,又称为二 硫代谷胱甘肽,是两分子的谷胱甘肽氧化而成,GSSG会被谷胱甘肽还原酶还原成GSH,因此机体中大多数是以还原型式存在。

  通过 2-乙烯氮苯抑制样品中原有的还原型谷胱甘肽,然后利用谷胱甘肽还原酶将GSSG 还原为GSH。再利用谷胱甘肽能和 5.5’-二 硫代-双-(2-密斑油甲酸)(5.5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid,DTNB)反应产生 2-硝基-5-苯硫醇甲酸。2-硝基-5-苯硫醇甲酸在波长 412nm 处具有最大光吸收的特点,借此测定氧化型谷胱甘肽的含量。