方法名称

　　三磷酸腺苷二钠原料总核苷酸的测定分光光度法

　　应用范围

　　该方法使用分光光度法测定三磷酸腺苷二钠散装药物中总核苷酸的含量。

　　本方法适用于三磷酸腺苷二钠原料 药。

　　方法原理

　　向待测试品中加入0.1 mol / L磷酸缓冲液制成供试液。置紫外可见分光光度计，在259nm波长处测量吸光度，并计算其含量。

　　试剂

　　磷酸缓冲液(0.1mol/L)

　　仪器设备

　　紫外可见分光光度计

　　试样制备

　　1.磷酸缓冲液(0.1mol/L)

　　取磷酸氢二钠35.8g，加水至1000mL。无水磷酸二氢钾13.6g，加水至1000mL，二液互调pH值至7.0.

　　2. 供试品溶液的制备

　　精密称取供试品适量，加入0.1 mol / L磷酸盐缓冲液溶解，制成每1 mL含20ug的溶液，即得待测溶液。

　　注：“精密称取”是指称取量应精确到称量的千分之一，精密量取是指测量体积的准确度应符合国家标准中移液器的精度要求。

　　操作步骤

　　取供试品溶液照紫外分光光度法，于波长259nm处测定吸收度。按C10H14N5Na2O13P3的吸收系数(E1%1cm)为279计算，即得。

　　注：分光光度法应以配制供试品的同批溶剂为对照，采用1cm的石英吸收池，以吸收度最大的波长作为测定波长，一般供试品的吸收度读数，以在0.3-0.7之间的误差较小，仪器的狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半宽度。否则测得的吸收度偏低，狭缝宽度的选择，应以减少狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准，由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的吸收度后应减去空白读数，再计算含量。