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谷胱甘肽的检测方法

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  谷胱甘肽检测方法较多,比较常用的有碘量法、DTNB(Ellman试剂)法、亚硝基铁氰化钠法、荧光法、四氧嘧啶法和高效液相色谱法( HPLC),上述方法各有优点,在检测GSH含量时可根据实际情况,选择适合、灵敏、精确的检测方法。

  谷胱甘肽检测方法较多,比较常用的有碘量法、DTNB(Ellman试剂)法、亚硝基铁氰化 钠法、荧光法、四氧嘧啶法和高效液相色谱法( HPLC),上述方法各有优点,在检测GSH含量时可根据实际情况,选择适合、灵敏、精确的检测方法。

  DTNB比色法

  原理:DTNB与谷胱甘肽的巯基反应生成黄色的5 - 硫代 - 2 -硝 基苯甲酸,在412 nm波长处有最大吸收峰,而DTNB在400nm以上几乎没有吸收峰,向含有谷胱甘肽的试样中加入少量的DTNB,将反应液在412 nm处测定吸收值,根据吸收值的大小即可求得谷胱甘肽含量。

  方法步骤:

  1、DTNB贮存液配制:将0.01 mol/L的DTNB溶解于0.05 mol/L的磷酸缓冲液(pH7.0)中形成DTNB贮存液。

  2、DTNB分析液配制:将DTNB贮存液用0.5 mol/L、pH8.0的Tris - HCl缓冲液稀释100倍,配成DTNB分析液,避光放置,现配现用。

  3、操作步骤:取谷胱甘肽标准品溶液或待测样品溶液(0.1 ~ 3.0 mol/L)0.5 mL,加入到1.5 mL浓度为0.15 mol/L的NaOH溶液中,再加入3%的甲醛溶液05mL,在pH8.0、25℃下反应2 min,反应结束后。取反应液0.5 mL加入DTNB分析液,在25℃下反应5 min,于波长412 nm下测定吸收值,根据两者的吸光度,计算差值,代入标准曲线,计算出谷胱甘肽的含量。